Efecto de la regulación de la actividad de Nrf2 sobre modelos de cáncer de mama RE-positivo resistentes a metabolitos derivados del tamoxifeno

Abstract

Introducción: El cáncer de mama es la neoplasia maligna más frecuente en mujeres a nivel mundial. Aproximadamente el 80 % de los casos expresan el receptor de estrógenos alfa (REα), y el tamoxifeno constituye el tratamiento coadyuvante de elección. No obstante, hasta un tercio de las pacientes presentan recaídas, muchas de ellas asociadas al desarrollo de quimiorresistencia. Previamente, en nuestro grupo de trabajo se generó una variante celular resistente a los metabolitos del tamoxifeno (MCF-7VarH), derivada de la línea celular MCF-7 positiva a REα, la cual adquirió un fenotipo similar al cáncer de mama triple negativo (TNBC). Esta variante presentó una disminución en la expresión de receptores hormonales y una mayor capacidad migratoria. Además, mostró una mayor expresión del Factor nuclear eritroide 2 relacionado con el factor 2 (Nrf2), un factor de transcripción que se ha relacionado con la quimiorresistencia y la progresión tumoral. Cabe destacar que, hasta el momento no se han reportado estrategias selectivas y seguras para modular su actividad. Objetivos: Caracterizar el papel de Nrf2 en el cambio fenotípico observado en la variante MCF-7VarH, así como modular la expresión y actividad de Nrf2 mediante siRNAs y moléculas pequeñas. Materiales y métodos: Inicialmente, se activó la vía de Nrf2 de forma independiente al estrés oxidativo tanto en la variante parental como en MCF-7VarH. Posteriormente, se evaluaron la expresión, localización subcelular y actividad transcripcional de Nrf2 mediante las técnicas de western blot y microscopia de epifluorescencia. Asimismo, se comparó la capacidad migratoria e invasiva de ambas variantes mediante ensayos en cámara de Boyden, así como la secreción de metaloproteinasas al medio extracelular mediante el ensayo de zimografía tras la activación de Nrf2. Finalmente, se exploró la modulación de Nrf2 mediante el diseño y síntesis de siRNAs dirigidos contra el mRNA de NFE2L2 y mediante la identificación de moléculas pequeñas con la capacidad de unirse al dominio Neh1 de Nrf2 mediante docking molecular. La eficiencia de transfección se evaluó mediante western blot y el efecto de las moléculas seleccionadas sobre la viabilidad se evaluó mediante ensayos de MTT. XII Resultados: Se determinó que Nrf2 desempeña un papel relevante en los procesos relacionados a la progresión tumoral en la variante MCF-7VarH. Se diseñaron y sintetizaron dos siRNAs contra el mRNA de NFE2L2. Dichos siRNAs redujeron la significativamente la expresión de Nrf2 y de su blanco NQO1, así como la capacidad migratoria celular en MCF-7VarH. Asimismo, disminuyeron la capacidad invasiva y en la secreción de metaloproteinasas. Por otra parte, mediante docking molecular, se seleccionaron 10 moléculas con la capacidad de unirse al dominio Neh1 de Nrf2, crítico para su unión al ADN, los cuales fueron denominados BQ1-BQ10. Entre ellas, el compuesto BQ5, mostró resultados prometedores y de forma preliminar evidenció, una interacción directa con Nrf2. Conclusión: Los resultados obtenidos sugieren que Nrf2 participa activamente en la progresión tumoral y en los cambios fenotípicos observados en MCF-7VarH. Por lo tanto, la modulación de este factor de transcripción podría representar una estrategia para el tratamiento del cáncer de mama quimiorresistente, lo que resalta la importancia de continuar con la búsqueda de nuevas estrategias seguras y efectivas dirigidas a Nrf2.